尿激酶活性测定
比活测定
(1) 试剂 牛纤维蛋白员溶液 取牛纤维蛋白员,加巴比妥一氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含6.67mg可凝结蛋白的溶液。
牛凝血mei溶液 取牛凝血mei,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含6.0 单位的溶液。
牛纤维蛋白溶酶原溶液 取牛纤维蛋白溶液酶原,加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0 )制成每1ml 中含1 ~1.4 酪蛋白单位的溶液(如溶液浑浊,离心,取上清液备用)。
混合溶液 临用前取等容积的牛凝血mei溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液,混匀。
(2) 标准品溶液的制备 取尿激酶标准品,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含60单位的溶液。
(3) 供试品溶液的制备 取本品适量,用巴比妥-氯化钠缓冲液(pH 7.8)溶解、混匀,并稀释成与标准品溶液相同的浓度。
(4) 测定法 取试管4 支,各加牛纤维蛋白员溶液0.3ml ,置37℃±0.5℃水浴中,分别加入巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml,依次加标准品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml,再分别加混合溶液0.4ml ,立即摇匀,分别计时。反应系统应在30~40秒内凝结,当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终点,记时。以尿激酶的浓度为横座标,以反应终点时间与入水浴时间的差值为纵座标,在双对数纸上绘制标准曲线,应呈直线。供试品按上法测定,在标准曲线上求得效价(单位)。标准品和供试品各作二次,所得的直线亦应平行,否则应重复试验。
蛋白质含量 取本品约10mg,精密称定,照氮测定法(附录Ⅶ D第二法)测定,将结果乘以6.25,即得供试品中蛋白含量,并计算每1mg供试品中的蛋白量(mg)。
比活 按下式计算比活。
每1mg供试品的效价(单位)
比活=──────────────
每1mg供试品中蛋白量(mg)
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